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壳寡糖行业标准征求意见稿发表时间：2020-01-07 00:00 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T ××××—×××× 壳寡糖 Chitooligosaccharides
-XX-XX发布 XXXX-XX- 实施 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会归口。 本标准起草单位： 本标准主要起草人： 壳寡糖 范围 本标准规定了壳寡糖的术语和定义、相对分子质量及结构式、分类、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。 本标准适用于以壳聚糖为原料，经过降解、分离、干燥等工艺制成的壳寡糖产品的生产、检验和销售。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 191 包装储运图示标志 GB 4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定 GB 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB 4789.10 食品安全国家标准 食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB 5009.4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB/T 5009.11 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 7718 食品安全国家标准 预包装食品标签通则 GB 2762 食品安全国家标准 食品中污染物限量 JJG 453 标准色板检定规程 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 壳寡糖 Chitooligosaccharides 由氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖经β-（1，4）糖苷键连接而成的低聚糖及其盐，又称壳低聚糖或低聚壳聚糖。 相对分子质量及结构式 相对分子质量：340-3500Da，（按2007年国际原子量表） 结构式 分类 根据产品应用领域的不同，壳寡糖可分为： ——食品工业用壳寡糖。 ——其他行业用壳寡糖。 注：食品工业用壳寡糖生产工艺应符合卫生计生委公告。 根据氨基葡萄糖含量（以干基计）不同，壳寡糖可分为：P50型、P60型、P70型、P80型四种类型。 要求 感官要求 应符合表1规定。 感官要求
理化要求 应符合表2的规定。 理化要求
污染物限量要求 食品工业用壳寡糖应符合GB 29941中的规定。 微生物要求 食品工业用壳寡糖应符合表3的规定。 食品工业用壳寡糖微生物指标
试验方法 基本要求 本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T 6682中水的规格，所用试剂，在未注明其他规格时，均指分析纯（AR）。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其它要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。 感官 取适量样品，倒在标准白板（白板应符合JJG 453的要求）上，在自然光线下，用肉眼观察样品的色泽，性状，有无杂质，并嗅其味。 壳寡糖含量的测定 高效液相法 原理 壳寡糖经浓盐酸水解生成氨基葡萄糖盐酸盐，根据氨基葡萄糖盐酸盐在流动相和固定相之间具有不同的分配系数，将水解后的试样注入液相色谱，用乙腈/水做流动相，目标物流出后，经蒸发光散射检测器检测，用外标法定量测定。 仪器和设备 分析天平：精度0.1 mg。 pH计。 旋转蒸发仪。 高效液相色谱仪：带蒸发光散射检测器。 试剂和溶液 浓盐酸。 乙腈：色谱纯。 氨基葡萄糖盐酸盐(≥99%)。 分析步骤 试样的制备 准确称取壳寡糖试样50 mg（精确到0.1 mg）于水解管中，加入3 mL浓盐酸，于100℃±5℃条件下水解3 h ~4 h，冷却，用旋转蒸发仪蒸发除酸（或用2mol/L~5 mol/L氢氧化钠溶液中和至pH 5~7），然后转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，通过水系滤膜（0.22μm）过滤，取滤液，进样。 注：水解时间可根据产品情况作调整。 参考色谱条件 色谱柱：氨基柱(4.6 mm×250 mm)或其他同等分析效果的色谱柱。 流动相：乙腈/水=80/20。 流速：1.0 mL/min。 柱温：30℃。 蒸发光检测器：蒸发温度60℃，雾化温度30℃。 进样量：10 µL。 注：待仪器基线平稳后再进样。对于中和除酸的样品，需根据含盐情况降低进样量。 标准曲线的绘制 分别准确称取20 mg、40 mg、60mg、80mg氨基葡萄糖盐酸盐（精确到0.1 mg），按试样项方法处理，用水定容到刻度，得到氨基葡萄糖盐酸盐分别为0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.2 mg/mL、1.6 mg/mL系列标准溶液。在参考色谱条件下进样，以色谱峰面积的对数值为纵坐标，标准物质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 试样的含量测定 在相同色谱条件下，将处理后的试样溶液注入色谱仪中，记录色谱峰的保留时间和峰面积。用氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液的色谱峰保留时间定性，用氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液色谱峰的峰面积的对数值来定量。 结果计算 壳寡糖含量（以氨基葡萄糖含量计，以干基计）按公式(1)计算： …………………………（1） 式中： ——壳寡糖的含量，以氨基葡萄糖计，以干基计，单位为质量百分数（%）； ——由标准曲线查得的氨基葡萄糖盐酸盐的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)； 50——样品体积，单位为毫升（mL）； ——试样的质量，单位为毫克(mg)； ——待测壳寡糖样品的含水量，单位为质量百分数（%）； ——待测壳寡糖样品中的单糖含量，单位为质量百分数（%）； 0.8309——换算系数，为样品对应的氨基葡萄糖分子量与氨基葡萄糖盐酸盐标准品之比。 允许误差 试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。 单糖含量的测定 仪器和设备 分析天平：精度0.1 mg。 高效液相色谱仪：带蒸发光散射检测器。 试剂和溶液 氨基葡萄糖盐酸盐(≥99%)。 乙腈：色谱纯。 分析方法 对照品溶液制备 取氨基葡萄糖盐酸盐和N乙酰氨基葡萄糖各50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，平行制备两份。精密移取上述溶液2 mL置于50 mL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，用水系滤膜（0.45 μm）过滤，弃初滤液0.5 mL，取续滤液，待测。 样品溶液制备 准确称取壳寡糖试样200 mg，置50 mL容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，用水系滤膜（0.45 μm）过滤，弃初滤液约0.5 mL，取续滤液，即得。 参考色谱条件 色谱柱：氨基柱(4.6 mm×250 mm)或其他同等分析效果的色谱柱。 流动相：乙腈/水=80/20。 流速：1.0 mL/min。 柱温：30℃。 蒸发光检测器：蒸发温度60℃，雾化温度30℃。 进样量：20 μL。 注：待仪器基线平稳后再进样。 计算 样品中单糖含量按公式（2）计算： ………………………（2） 式中： ——样品中的单糖含量，单位为质量百分数（%） CD——对照品溶液中氨基葡萄糖盐酸盐的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； CN——对照品溶液中N乙酰氨基葡萄糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； MT——样品溶液中壳寡糖的质量，单位为毫克（mg）； rU ——样品溶液中氨基葡萄糖的峰面积； rS ——样品溶液中N乙酰氨基葡萄糖的峰面积； rD——对照品溶液中氨基葡萄糖的峰面积； rN——对照品溶液中N乙酰氨基葡萄糖的峰面积； D ——样品溶液稀释倍数。 允许差 平行样检测结果绝对差值≤0.5%。 壳寡糖平均分子量 分光光度计法 原理 采用端基法测定壳寡糖的平均分子量，由于乙酰丙酮试剂与壳寡糖反应产生生色原时，仅末端的糖单位能开环反应，其余的糖单位不能开环与乙酰丙酮反应。因此，测得的分光光度值与壳寡糖的摩尔浓度应具有线性关系。 仪器和设备 分析天平：精度0.1 mg。 分光光度计。 试剂和溶液 氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液 准确称取氨基葡萄糖盐酸盐100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。取定容后的溶液10 mL，置于烧杯中，调pH至7，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，4℃冰箱中保存备用。 乙酰丙酮溶液 取乙酰丙酮3.5 mL，溶于1 mol/L碳酸钠溶液中定容至50 mL，混匀，现用现配。 对-二甲氨基苯甲醛溶液 称取对- 二甲氨基苯甲醛0.8 g，溶于15 mL无水乙醇及15 mL浓盐酸的混合液中，摇匀保存于棕色瓶中，现用现配。 标准曲线的绘制 精密量取氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液（7.5.1.3.1）0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL和5.0 mL，分别置于15 mL具塞试管中，各加水5.0 mL、4.0 mL、3.0 mL、2.0 mL、1.0 mL、0.0 mL，再分别加乙酰丙酮溶液1 mL，摇匀，置沸水浴中加热25 min，取出，置水浴中冷却。各加对氨基苯甲醛溶液1mL，用无水乙醇加至10 mL，摇匀，60℃水浴中保温1 h，快速冷却至室温，以不含氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液为空白，在525 nm波长处测定吸光度值(D)，以氨基葡萄糖盐酸盐溶液浓度(μg/mL)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 注：冷却至室温后，需在30 min内完成测定。 样品平均分子量的测定 准确称取100 mg壳寡糖样品，置于烧杯中，加适量的水溶解，摇匀，调pH至7，定容至100 mL容量瓶中混匀，吸取体积为V的稀释后的溶液（参考取样量为3 mL）于试管中，加水2 mL、乙酰丙酮溶液1 mL，后续步骤同“标准曲线的绘制”，测出D值，通过标准曲线查得的待测液浓度c1(mg/mL)。 计算 壳寡糖平均分子量按公式(3)计算： …………………………（3） 式中： M——壳寡糖平均分子量，单位为道尔顿（Da）； m3——样品的质量，单位为毫克(mg)； ——待测壳寡糖样品的含水量，单位为质量百分数（%）； V——取样体积，单位为毫升(mL)； 161.1 ——脱去1个水分子后的氨基葡萄糖残基分子量，单位为道尔顿（Da）； c1——查标准曲线获得的试样中壳寡糖的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)； 1000 ——稀释倍数。 允许误差 试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。 水分的测定 分析步骤 用已干燥至恒重的称量瓶称取壳寡糖试样约1 g（精确至0.0001 g），放入真空干燥箱内，同时在干燥箱中放置足量的P2O5，干燥过程中如果内置的P2O5已经吸潮，需要更换新的干燥的P2O5。40 kPa～53 kPa、60℃±5℃下连续干燥4 h，得到干燥试样。 计算 试样中水分的含量按式(4)进行计算： …………………………（4） 式中： ——试样中水分中的含量，单位为质量百分数（%）； m4——称量瓶和试样的质量，单位为克(g)； m5——称量瓶和试样干燥后的质量，单位为克(g)； m——试样的质量，单位为克(g)。 允许误差 试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。 灰分的测定 按GB5009.4规定的方法测定。 水不溶物的测定 分析步骤 称取试样5 g～10 g，加入400 mL蒸馏水中，搅拌至完全溶解，用在105℃±2 ℃下烘干至恒重并称重的砂芯漏斗（0.04 mm）过滤，105 ℃±2 ℃下烘干至恒重。 计算 水不溶物的质量分数按公式（5）计算： …………….………………… （5） 式中： w6——样品中水不溶物的质量分数，单位为质量百分数（%） m6——烘干后试样与漏斗总质量，单位为克（g）； m7——烘干后漏斗质量，单位为克（g）； m8——试样质量，单位为克（g）。 允许差 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。 pH的测定 称取试样1 g，加入99 mL水，配制成浓度为1%的试样液，用磁力搅拌器搅拌1 h，然后按GB/T 9724的规定测定试样液的pH。 菌落总数 按GB 4789.2测定。 沙门氏菌 按GB 4789.4测定。 金黄色葡萄球菌 按GB 4789.10测定。 检验规则 组批 同原料、同工艺生产的，同一包装线同一天包装出厂（或入库的），质量均一的产品为一批。 抽样 产品按批抽样。无菌条件下，批量少于600件时，从不少于3件最小规格包装中，抽取1 kg样品。批量大于600件时，按包装件数的0.5%比例最小规格包装中，抽取1 kg样品。 留样 将所取样品混匀后，分为二份，一份检验，一份封存备查。密闭保存于包装袋或磨口瓶中，粘贴标签，并注明生产厂名、产品名称、批号、数量、取样日期。 出厂检验 产品出厂前，按本标准规定逐批进行检验。符合标准要求，签署质量检验合格报告单的产品方可出厂。 出厂检验项目为感官、平均分子量、壳寡糖含量、水分、灰分、水不溶物、pH。 型式检验 检验项目为本标准要求中规定的全部项目。一般情况下，型式检验半年进行一次。有下列情况之一时，亦应进行型式检验： a）原辅材料有较大变化时； b）更改关键工艺或设备时； c）新试制的产品或正常生产的产品停产3个月后，重新恢复生产时； d）出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时； e）国家质量监督检验机构按有关规定需要抽检时。 判定规则 如有一项不合格，应重新自同批产品中抽取2倍量样品进行复验，以复验结果为准。若仍有一项不合格，则判整批产品不合格。 标志、包装、运输、贮存 标志 产品标签标示应符合GB 7718的规定，作为预包装食品销售的产品还应符合GB 28050的规定。产品标签还应注明产品类型。包装储运图示按GB/T 191的规定执行。 包装 应采用符合食品卫生要求的包装材料，经检验合格后方可使用。严格密封，以防产品吸潮和漏出。 运输 运输工具应清洁；禁止与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混装、混运，应避免受潮、受压、暴晒；装卸时轻搬、轻放。 贮存 产品应贮存在阴凉、干燥、通风、清洁的仓库内。仓库温度不得超过35℃。不得露天存放，不得与有毒有污染的物品或其他杂物混存。 _________________________________ |